CFDA, SE 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針

產(chǎn)品描述

CFDA-SE分子式為C₂₉H₁₉NO₁₁，分子量為557.47，CAS號(hào)為150347-59-4，CFDA SE英文名是Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，CFDA-SE可用于細(xì)胞示蹤，也可用于細(xì)胞增殖檢測(cè)。CFDA SE可以通過(guò)完好的細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以隨機(jī)地(spontaneously)、不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的賴(lài)氨酸殘基（Lysine）或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，標(biāo)記時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。

CFDA, SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm激發(fā)，發(fā)射波長(zhǎng)為518nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL1 檢測(cè)通道。除了流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀察。

CFDA-SE標(biāo)記的分裂細(xì)胞每分裂一次，子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以檢測(cè)出沒(méi)有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞熒光強(qiáng)度減半(1/2)，分離兩次的細(xì)胞熒光強(qiáng)度再減半(1/4)，以此類(lèi)推，熒光強(qiáng)度按照1/2，1/4，1/8，1/16的規(guī)律逐漸遞減。采用CFDA SE通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)獲得的檢測(cè)結(jié)果每一個(gè)峰代表一種分裂次數(shù)的細(xì)胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數(shù)的細(xì)胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒(méi)有分裂或分裂次數(shù)較少的細(xì)胞會(huì)逐漸減少直至檢測(cè)不到。CFSA，SE可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。經(jīng)CFDA, SE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。CFDA, SE常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可用于成纖維細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞，造血祖細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測(cè)。CFDA SE如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。我們的CFDA SE探針產(chǎn)品以25mg粉末包裝的形式提供。

運(yùn)輸與保存方法

常溫運(yùn)輸，-20℃干燥避光保存，保質(zhì)期24個(gè)月。避免反復(fù)多次凍融。

使用方法

1.保存液配制（5mM）

按需配制，如取DMSO 360μL，溶解1mg CFSE，超音波溶解，得到5mM CFSE保存液；將其按40μL體積分裝于避光的無(wú)菌凍存管中，-20℃可保存2個(gè)月。

注意：CFSE遇水容易分解，所以在配置時(shí)候要用無(wú)水DMSO，配置后計(jì)算用量盡快使用，多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有機(jī)溶劑，對(duì)于蛋白質(zhì)會(huì)有損傷，所以在配置的時(shí)候DMSO用量越少越好；

2. 工作液配制

取5mM的CFSE稀釋液1 ul，加入1ml 10％FCS 的PBS稀釋。

3.染色

a.重懸細(xì)胞。用有5％FCS的PBS重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度一般為1x1x10⁶/ml （體外實(shí)驗(yàn)）或1x1x10⁷/ml（轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)）。

b.染色。1ml DFSE工作液與1ml細(xì)胞懸液混合后37℃孵育5－10分鐘。期間輕輕混勻兩次（用手輕彈管壁，切忌吹打）。

c.終止染色。用*培養(yǎng)液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5分鐘后進(jìn)行第3次洗滌。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混勻 ，然后續(xù)加入7ml）, 輕輕混勻1min（用手輕彈，切忌吹打）,1 500 r/ min 離心5 min。

d.流式細(xì)胞儀在FL1通道檢測(cè)。