產(chǎn)品描述

本產(chǎn)品是一款基于沉淀法的外泌體分離試劑盒，適用于多種樣本的外泌體分離，具有操作簡便、分離速度快和高回收率的優(yōu)勢。本試劑盒分離的外泌體可用于WB分析、NTA或納米流式粒徑分析、電鏡檢測、組學(xué)研究、細胞和動物功能研究等。本試劑盒兼容多種樣本類型，適用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清和尿液等。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運輸與保存

常溫運輸。組分A在4℃保存，組分B在常溫保存，有效期 12個月。

使用方法

自備儀器、試劑與耗材：高速冷凍離心機；離心管

1. 準備工作

(1) 取出在 4℃ 保存的外泌體濃縮劑，使其恢復(fù)至室溫。

(2) 建議使用新鮮樣本；如樣本保存在-80℃，請于37℃水浴中解凍備用。

2. 樣品預(yù)處理

(1) 去除細胞：對含細胞樣品，4℃，300g，離心 5min，將上清轉(zhuǎn)移至新離心管；無細胞樣品可跳過此步驟。

(2) 去除細胞及細胞碎片：4℃，2,000g，離心10min，將上清轉(zhuǎn)移至新離心管。

(3) 去除大體積顆粒：將步驟(2)獲得的上清液在4℃，12,000g，離心15min，取上清轉(zhuǎn)移至新離心管?；蛘撸簩⒉襟E(2)的上清液通過 0.45 μm 微孔濾膜過濾，收集濾液。

3. 沉淀外泌體

(1) 將預(yù)處理后的樣品 20 mL 加入 50mL 離心管，加入 5mL 外泌體濃縮劑，渦旋混勻1min（務(wù)必混勻）。若需調(diào)整體積，可按樣本:外泌體濃縮劑= 4:1 的比例等比放大或縮小。

(2) 混勻后，4℃孵育 8 h以上；如時間允許，推薦在 4℃ 過夜孵育，但建議不超過24h。

(3) 將樣品4℃，12,000g 離心 45 min。棄上清，吸棄或小心倒出上清后，使用 200 μL 移液器盡量輕輕吸凈殘余上清。

4. 回收外泌體

(1) 重懸外泌體：向沉淀中加入 200μL無菌PBS，用移液器輕柔上下吹打，充分混勻。建議每 20mL 細胞培養(yǎng)上清用 200μL 無菌 PBS 重懸。

(2) 收集外泌體顆粒：將重懸液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL 離心管，在 4℃、12,000g 下離心 5min，保留上清，此上清液中富含外泌體顆粒。注：若沉淀較多，取離心后上清液，12,000g，5min，離心多次，直至無明顯沉淀，該上清液即為外泌體。

5. 精純外泌體

(1) 純化外泌體：將收集的外泌體粗品轉(zhuǎn)入外泌體純化濾器（EPF）上室，4℃、3000×g 離心 10 min。離心后，收集 EPF 柱底的濾液，即為純化后的外泌體顆粒。注：EPF不可重復(fù)使用，如 EPF發(fā)生堵塞，需將外泌體 12,000g 離心 30min，取上清，再用新的 EPF 純化。

(2) 外泌體儲存：分離的外泌體可立即用于后續(xù)實驗；如需 24 h 內(nèi)使用，可 4℃ 保存，長期保存請分裝后置于 -80℃。

注意事項

1． 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2． 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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