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2 x Taq PCR Master Mix 使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/14      點擊次數(shù):4146

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2 x Taq PCR Master Mix

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

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價格(元)

2 x Taq PCR Master Mix

D1101L1146

1 mL

-20℃

200

產(chǎn)品簡介

× Taq PCR Master Mix是即用型的常規(guī)PCR預混合溶液,含有Taq DNA Polymerase、dNTP混合物、MgCl2以及優(yōu)化的緩沖體系,它以2×的濃度形式存在,反應時只需加入所需引物和模板,用水稀釋即可立刻配制完PCR體系。本產(chǎn)品中含有PCR產(chǎn)物具有3’-dA突出端,可輕松克隆至T載體。

運輸與保存方法
冰袋運輸。收到產(chǎn)品后放到-20 ºC保存,有效期12月以上。

使用方法

1.  反應體系配制(50μl):

模板DNA

optional

引物1(10 μM)

μL

引物2(10 μM)

μL

2× PCR Master Mix (With Dye)

25μL

ddH2O

up to 50μL

注:針對不同模板的*反應濃度有所不同,下表為50μl反應體系推薦模板使用量,僅供參考。

人基因組DNA

0.1~1 μg

大腸桿菌基因組DNA

10~100 ng

λDNA

0.5~5 ng

質粒DNA

0.1~10 ng

2.  PCR循環(huán)反應條件

94

5 min(預變性)

94

30 sec

35個循環(huán)

55℃*

30 sec    

72

30 sec

72

7 min(*延伸)

注:退火溫度需要根據(jù)引物的Tm值調整,一般設置成低于引物Tm值1-2℃即可。

注意事項
1.由于Taq DNA Polymerase室溫下也有一定的反應活性,PCR反應體系配制需在冰上進行。體系混勻后快速置于PCR儀進行反應。這樣可以減少反應準備階段的非特異擴增,有助于得到更好的PCR結果。
2. 引物設計注意事項
2.1 引物3’端zui后一個堿基選擇C或G,端zui后8個堿基應避免出現(xiàn)連續(xù)錯配;端盡量避免發(fā)卡結構的出現(xiàn);
2.2 引物Tm值控制在55℃-65℃之間;
2.3 引物額外附加序列,即與模板非配對序列,不應參與引物Tm值計算;

2.4 引物GC含量控制在40%-60%之間;
2.5 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。

 

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