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PikoOrange 蛋白定量試劑盒 使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/14      點(diǎn)擊次數(shù):1367

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PikoOrange蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

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價格(元)

PikoOrange 蛋白定量試劑盒

D1101L1128

100 assays

室溫

180

 

產(chǎn)品描述

PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒,其檢測蛋白濃度范圍為0.1-15 ug/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析,PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳,此外,與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測定技術(shù)相比具有更加的線性和重現(xiàn)性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質(zhì)之間的zui小變異性,且熒光信號穩(wěn)定長達(dá)16小時;其受測樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。

需特別注意的是,PikoOrange對鹽類、緩沖液、去垢劑或是其他化學(xué)物質(zhì)都有不同程度的耐受性(表2)。

 

                            圖1:PikoOrange比NanoOrange有更好的線性和重現(xiàn)性

 

產(chǎn)品組分

組分

D1201L2222

D1201L2221

APikoOrange buffer, 10X (contains 2mM sodium azide)

2.5 mL

25mL

BPikoOrange dye, 500X in DMSO

50 uL

0.5 mL

CBovine serum albumin (BSA) standard, 2mg/mL (contains 2 mM sodium azide)

40 uL

0.4 mL

技術(shù)參數(shù)

Ex/Em 480/598 nm (結(jié)合BSA)。

運(yùn)輸和保存方法

室溫保存,不要冷藏PikoOrange緩沖液。PikoOrange Dye需避光保存,產(chǎn)品可穩(wěn)定保存至少12個月。如果緩沖液出現(xiàn)沉淀,可加熱到37℃并漩渦溶解。如果長時間不用,組分C應(yīng)避光保存在4℃。

使用方法

1、準(zhǔn)備1x PikoOrange緩沖液1:10 稀釋10x緩沖液在dH2O。例如,添加1 mL10x 緩沖液至9 mL dH2O1 x PikoOrange緩沖液可以儲存在室溫下。

2、使用前準(zhǔn)備PikoOrange工作液:將500xPikoOrange染料按1:500用1x PikoOrange緩沖液稀釋。例如,添加10 uL 500xPikoOrange染料值5 mL 1x PikoOrange緩沖液。

注意:您將需要大約3 mL工作液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(見表1)以及每孔檢測樣品250 ul工作液。

3、準(zhǔn)備未知樣本:10 uL 樣本添加 250 uLPikoOrange工作液。

注意:您可能需要稀釋未知樣本的得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會減少干擾物質(zhì)的影響。

4、準(zhǔn)備一個蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線所需的BSA濃度,如表1所示。

5、樣本和標(biāo)準(zhǔn)蛋白加熱至90- 95 10分鐘,此過程需避光操作。

6、取出樣本室溫避光放置20分鐘冷卻。短時間離心以收集全部樣本。

7、每個標(biāo)準(zhǔn)樣品或未知樣品取200 uL轉(zhuǎn)移到96孔酶標(biāo)板,熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長為480/598 nm。

注意:另外,樣品可以被轉(zhuǎn)移到熒光試管使用熒光儀測量。如果需要超過200 uL體積測量,等比例放大配置方案。

 

1:準(zhǔn)備BSA樣品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

 

BAS體積

工作液體積

BSA 終濃度(ug/mL)

A

7.5 uL BSA std (2mg/mL)

1 mL

15

B

333 uL solution A

167 uL

10

C

250 uL solution B

250 uL

5

D

250 uL solution C

250 uL

2.5

E

200 uL solution D

300 uL

1

F

250 uL solution E

250 uL

0.5

G

250 uL solution F

250 uL

0.25

H

100 uL solution G

150 uL

0.1

I

0 mL

250 uL

0

2:PikoOrange對不同化學(xué)物質(zhì)的耐受性

化合物

zui高承受濃度

SDS

0.01%

Triton X-100

Below 0.001%

Tween 20

Below 0.001%

CHAPS

Below 0.001%

Sodium deoxycholate (DOC)

Below 0.001%

Urea

10 mM

DTT

100 mM

beta-ME

0.1%

Ammonium sulfate

1 mM

Sodium azide

2 mM

Imidazole

50 mM

DNA

10ug/mL

EDTA

1mM

Sucrose

10 mM (0.34%)

Glycerol

1%

PBS

0.02X

NaCl

1 mM

CaCl2

0.01 mM

MgCl2

0.2 mM

 

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